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公司新闻/正文
ELISA中常见问题及解决方法
930 人阅读发布时间：2016-07-25 16:20
ELISA 试验以灵敏度较高、特异性较好的特点被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，除正常反应外，有时常见到一些错误的结果。引起ELISA测定错误结果的原因主要有：①标本因素；②试剂因素；③操作因素。
下面就一些常见ELISA操作过程中的问题汇总一一分析：
下面就一些常见ELISA操作过程中的问题汇总一一分析：
| 问题 | 原因分析 | 解决方法 |
| 反应信号偏低 | 试剂未充分平衡 | 试剂从2～8℃冰箱取出后，于室温平衡 至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温（约25℃） |
| 包被条件不适 | 提高包被浓度，延长包被时间，确保包被温度 | |
| 培养箱温度不足37℃ | 注意培养箱温度，放入反应板后尽量减少开启次数以 免影响温度恒定，非隔水式培养箱尤其应注意 | |
| 反应不够充分 | 准确定时，确保反应在最适温度进行 | |
| 二抗结合不够 | 确定最佳二抗浓度，确保反应时间 | |
| 洗涤不规范 | 按要求洗涤及洗涤次数 | |
| 移液器吸液量不足，吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁 | 校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密，吸嘴内壁要清洁，最好一次性使用 | |
| 终止液误作洗涤液或当底物液使用 | 每次加液前均应看清标签 | |
| 显色液配方不当 | 增加显色底物的量 | |
| 底物作用时间不足 | 准确定时 | |
| 阴性对照呈现阳性 | 试剂或耗材污染 | 更换试剂，使用洁净无菌耗材或一次性耗材 |
| 洗板出现问题 | 用更强洗涤液；正确洗板 | |
| 包被抗体与二抗有交叉反应 | 更换包被抗体或二抗 | |
| 抗体使用远远超量 | 减少抗体使用量 | |
| 背景深，整版呈有色 | 封闭条件不佳 | 更换能力较强的封闭液，延长封闭时间，确保封闭温度 |
| 洗涤不充分，洗后未拍干，样品中其它成分残留或酶标记物残留 | 准确配置洗涤液，充分洗涤，彻底拍干；加样或加酶拍板的吸水纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染 | |
| 二抗产生非特异性吸附 | 降低二抗使用浓度，或减少二抗结合时间 | |
| 样品污染 | 样品应新鲜采集，或低温保存，防止污染 | |
| 反应温度不适或反应时间过长 | 保证反应温度37℃，准确定时 | |
| 试剂或耗材污染 | 保证无菌洁净，使用一次性枪头和耗材 | |
| 显色液不新鲜 | 使用现配显色液 | |
| 酶等试剂混用 | 不同批号试剂勿混用 | |
| 一次实验的标本量过多，操作中导致实际反应时间延长 | 合理安排实验，避免几块酶标板同时加样 | |
| 显色反应时间过长 | 控制好显色时间，及时终止 | |
| 梯度稀释时产生跳孔现象 | 稀释时有漏孔失误 | 认真操作 |
| 酶标板叠放受热不均 | 尽量避免多板叠放 | |
| 稀释时移液器未保持连续性 | 正确使用移液器，定时校正移液器 | |
| 洗板不均匀 | 确保完整加入洗涤液 | |
| 板底不干净 | 读数前确保板底净洁 | |
| 重复性不佳 | 样品数量多少不一，加样时间有长有短 | 重复某一样品时，加样时间尽可能与第一次接近 |
| 加样量不一致 | 样品稀释前应充分混匀，尽可能使用同一移液器并装紧枪头 | |
| 保温时间不一致，洗涤条件不一致，操作人员不一致 | 重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性 |