免疫组织化学（IHC）是临床环境和实验室研究人员的宝贵工具。IHC 技术以获得特异性组织靶标信号的清晰成像为目标。标记抗体用于原位结合特异性靶抗原，根据高质量的染色结果，细胞和靶标组分便可以清晰观察到。IHC 实验可以提供准确的数据，揭示抗原表达的分布情况，数量和强度，以加强和验证您的研究。试验方案设计会影响试验结果，方案的选择会影响所获得的结果质量。参考我们 Biorbyt 的经验，以及我们广泛的高品质产品，将为您每个阶段的研究提供专业的支持。


 免疫组化的应用

IHC 技术被全球研究人员用于诊断疾病，药物开发和广泛的生物学研究。细胞类型，组分，来源和病理的鉴定可以使用 IHC 独立或与其他技术结合实现其可视化观察。通过在与特定化学物质的反应中，间接地观察和量化细胞活性，以分析药物开发期间的功效。现代的 IHC 技术允许在各个研究层次进行高通量，多参数，准确的数据分析。


 免疫组化的基本步骤
 

免疫组化的基本步骤：

• 处理组织样本，福尔马林固定后石蜡包埋，或者速冻包埋。
• 孵育与目的蛋白特异性结合的抗体。
• 使用化学底物或荧光染料实现信号在显微镜下的可视化。

这听起来很简单，但其中有许多陷阱需要避免。优化您的 IHC 实验方案将可以节省您宝贵的实验时间和成本，并能获得可靠的结果。Biorbyt 拥有丰富的 IHC 技术知识和经验，将帮助您优化出完美的实验方案。我们不断开发我们的产品系列，为您提供科研最前沿的产品和最专业的技术专家支持。


9 个免疫组化的成功技巧

1.选择正确的抗体进行检测
       查看所使用抗体的已验证实验类型，我们网上的产品信息将为您提供帮助。最佳情况下，您选择应该是经过 IHC 验证的抗体，使用没有经过 IHC 验证的抗体将可能引入无法获得良好结果的风险。为了帮助您选择最优抗体，在 biorbyt 购买抗体时，我们会确定产品是否在石蜡（IHC-P）或冰冻切片（IHP-Fr）中进行了验证，以及是否在 Western Blot（WB）中进行验证。Biorbyt 的团队可以推荐哪些物种已经过测试，并根据免疫原序列的同源性预测抗体是否可以在不同物种中反应而提供参考建议。一旦选定抗体，您需要测试不同浓度的抗体以确定实验中最合适的抗体浓度。同时抗体稀释液的选择也会影响抗体的性能，biorbyt 可提供与抗体匹配的稀释液，选择我们使您的实验变得更轻松。
2. 样本组织准备
组织可以通过固定在福尔马林中，然后石蜡包埋制备石蜡切片或者冷冻包埋制备冰冻切片。 选择石蜡切片（IHC-P）或冰冻切片（IHP-Fr）的方法都有相应的优点和缺点，可以根据您的组织和抗原表达具体情况选择。冷冻组织会导致形态学变化，而石蜡包埋会引起一些收缩，产生高密度假阳性抗原。

3.  对照
合理对照的有效性和重要性是需要重点强调的。设置对照可以获得更加严谨性的研究结果，并且有助于在试验结果不理想的情况下用于故障排除。在您的每一次实验中，对照设置都有利于提高数据的可信度，并有助于您更清晰明了地分析感兴趣的结果。biorbyt 很乐意根据您选择的产品和实验方案给您推荐合理的阳性对照。

4.  组织固定

实验方案和方法的选择将影响最终切片的染色质量。您选择的方法将取决于组织类型，其年龄以及靶抗原。哪些研究方法适合您的样品，需要考虑的因素包括：所用固定剂的类型和浓度，固定时间，pH 值以及使用哪种添加剂。同样的，biorbyt 可以根据样本提供具体建议。
 

5.  抗原修复

抗原修复是获得高质量染色的重中之重。您的组织将需要通过加热或酶处理，以使抗体可以和抗原成功结合。使用热处理进行抗原修复有可能会对组织造成人为改变，因此应该设置相应的对照。组织固定过程会导致抗原决定簇发生交联，而阻止抗原抗体结合。在大多数情况下，使用酸性缓冲溶液进行热处理，可以使抗原决定簇重新暴露，并保持目标抗原的完整性而不影响与抗体结合。经过我们多次研究探索经验，并结合众多客户实验反馈，biorbyt 可以助您调整修复方式获得最佳结果。合理的抗原修复方式可以获得最佳的染色结果，当然修复方式的选择也应该包括部分使用碱性抗原修复缓冲液的靶标。
 

6. 封闭

这个过程是封闭组织中表达的非特异组分，例如可能影响您结果的生物素，碱性磷酸酶和过氧化物酶。生物素检测系统可以检测内源性生物素，为了避免这种情况，您需要实施生物素阻断系统。同样，如果使用辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶标记的二抗，组织表达的过氧化物酶和碱性磷酸酶可能会导致假阳性结果。为了避免这种情况，您应该使用 IHC 组织内源性酶阻断系统，Biorbyt 可以帮您选择最适合您的方案。
 

7. 非特异结合

Fc 受体等可以引起抗体的非特异性结合，阻断这些受体可以在与第一抗体孵育之前完成。 我们推荐选择与二抗相同种类的血清进行非特异封闭，或者使用 IHC 背景阻挡器，可以减少背景信号。延长封闭时间也可以有效地减少非特异性结合。

 

8. 检测系统选择
有一系列系统可通过使用荧光染料或显色底物用于检测蛋白质的位置和丰度。对于 IHC，最常用的系统是链霉亲和素-生物素系统。您选择的检测方法与检测系统是否匹配，会影响最终检测系统是否能有效地发挥其有效性。检测系统的选择取决于目的靶标信息及其表达水平。直接检测方法是利用标记的一级抗体。而间接检测是一抗是未标记的，并且使用针对一抗宿主物种产生的标记二抗，这种间接检测方法在 IHC 中更常用。因为偶联标记的二抗可以增强信号，所以如果蛋白质的丰度很低，那么间接检测就是很好的选择。如果您确定目标蛋白是高水平表达，直接检测的直标一抗是更好更高效的选择。您选择的检测抗体取决于您的实验方法，Biorbyt 可以根据您的实验提供具体指导。
 

9. 显色
为了达到染色的强度和准确性，染色剂和染色方案要根据组织切片，靶标蛋白，封片剂等进行最具选择。除了信号染色，核复染可以增加结果对比度和定位视角的观察。我们提供一系列染色剂旨在为您的每个实验提供最佳解决方案。
 

 

Biorbyt 团队致力于支持您的研究，使用我们专业的IHC知识和经验来帮您创建更准确，更强大，更可靠的结果。