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公司新闻/正文
后GFP时代 | 当GFP荧光淬灭：抗体如何让信号“死而复生”
56 人阅读发布时间：2025-11-26 11:28
2008年，下村脩、马丁·沙尔菲和钱永健因“发现和发展GFP”而荣获“诺贝尔化学奖”。
如果有人问，过去半个世纪生命科学领域最伟大的工具是什么？“绿色荧光蛋白GFP”必定榜上有名。它让我们真正“看见”了生命的过程，而不仅仅是静态的结构。
GFP的核心优势
在GFP之前，追踪特定蛋白在细胞内的动态，犹如在黑暗中摸索。免疫荧光虽强，但那是“固定”的瞬间，是死细胞的照片。而GFP的出现，让我们拥有了活细胞的现场直播。
其核心魅力在于：
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自主发光：只需蓝光或近紫外光激发，无需额外底物。
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基因编码：将
gfp基因与目标蛋白基因融合，表达的融合蛋白自带绿色荧光标签。 -
普适性：几乎在任何生物体中都能正常工作。
从此，我们得以实时观察蛋白的定位、迁移、相互作用乃至降解。转录动态、细胞分裂、肿瘤转移……无数曾经隐秘的生命剧场，第一次对科学家敞开了大门。
GFP的进化：从单一绿色到五彩斑斓
野生型GFP并非完美：它有轻微毒性、二聚化倾向、成熟速度慢，并且，只有一种颜色。
诺贝尔奖得主"钱永健院士"等人的工作开启了荧光蛋白的“调色板”与优化时代。通过蛋白质工程，对GFP发色团周围的氨基酸进行精巧设计，科学家们不仅创造了新的颜色，更极大地优化了GFP本身的性能。
其中，EGFP 的出现是一个里程碑。它通过两个关键突变（F64L和S65T），成功解决了野生型GFP的诸多痛点：
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F64L：大幅提高了在37℃下的折叠效率和成熟速度，使其能在哺乳动物细胞中快速亮起。
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S65T：将主激发峰优化至488 nm，与流式细胞仪和共聚焦显微镜的标配激光器完美匹配，同时增强了荧光强度和光稳定性。
EGFP一跃成为实验室中实际使用的“标准”绿色荧光蛋白，其综合性能远超野生型GFP。
更重要的是，基于同样的工程学原理，五彩斑斓的荧光蛋白家族诞生了：
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蓝色荧光蛋白
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青色荧光蛋白
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黄色荧光蛋白
更激动人心的突破来自俄罗斯科学家米哈伊尔·马茨团队在珊瑚中发现的红色荧光蛋白。这不仅丰富了我们的颜色选择，更因为红光穿透力更强、自体荧光干扰更小，为活体成像奠定了基础。
如今，我们的工具箱里充满了各种优化版本的荧光蛋白：光稳定性的、pH不敏感的、快速成熟的……它们共同构成了现代细胞生物学的视觉基石。
GFP及其衍生物的局限
随着研究的深入，GFP及其衍生物的局限性也愈发明显：
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信噪比问题：在表达量低、背景噪音高的场景下，微弱的荧光信号难以捕捉。
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固定样本的“死无对证”：在免疫染色、组织切片等经过固定的样本中，GFP的荧光信号会显著减弱甚至完全淬灭。这是因为固定过程破坏了蛋白质精细的三维结构，而荧光发射正依赖于这精妙的结构。
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无法追溯历史：GFP只标记“当下”正在表达的细胞。对于那些曾经表达过目标基因，但现在已关闭的细胞，GFP无能为力。
那么，当荧光蛋白本身“失声”时，我们该如何继续我们的研究？
当GFP沉默时，让抗体“开口说话”
这时，一个经典而强大的工具再次站到舞台中央——GFP抗体。
它完美地弥补了GFP荧光蛋白在应用中的关键短板：
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放大微弱信号：通过免疫荧光或免疫组化，利用抗体的高亲和力与信号放大系统（如二抗偶联荧光基团），可以检测到内源性GFP荧光无法企及的微弱表达。
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“复活”固定样本：在经甲醛等固定剂处理的样本中，即使GFP自身的荧光已淬灭，但其蛋白质骨架依然存在。高特异性、高灵敏度的GFP抗体可以精准地识别并结合上去，让信号在固定样本中“重见天日”。
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实现多元检测：利用GFP抗体，你可以轻松地进行Western Blot 来定量蛋白表达水平，进行Co-IP 来钓取与GFP融合蛋白相互作用的伙伴，甚至可以进行 ChIP-seq 实验（例如，当GFP与转录因子等DNA结合蛋白融合时，用以在全基因组范围内定位其DNA结合位点）
简而言之，GFP荧光蛋白让你“看到”活细胞，而GFP抗体则让你在任何条件下都能“抓住”并“研究”你的目标蛋白。
在实验中，您需要一个值得信赖的工具来获得确凿的数据。Biorbyt GFP高特异性抗体，正是为此而生。
产品亮点：
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卓越特异性：经严格验证，可识别GFP及其衍生物（如EGFP, YFP），与内源性蛋白无交叉反应。
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广泛应用性：适用于多种实验场景，如免疫荧光、免疫组化、Western Blot、IP、流式实验等。
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高灵敏度与低背景：为您带来清晰、可靠的实验结果，尤其在固定组织样本中表现优异。
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批次稳定：确保您不同时期的实验数据具有可比性和可重复性。
小鼠单克隆GFP-tag Antibody [orb323045]
适用于 IP, WB等实验。有文献引用，文献中研究样本是植物。
Western blot analysis of over-expressed GFP-tagged protein in 293T cell lysate
小鼠单克隆抗体GFP Tag Antibody [orb69018]
适用于ICC, IP, WB等实验。
Western blot analysis of extracts from HCC827 cells, untransfected (lane1) and transfected with GFP(lane2) using GFP antibody
Immunocytochemistry analysis of HCC827 cells using GFP antibody
山羊多克隆抗体GFP Antibody [orb11604]
适用于IF, IHC-Fr, IHC-P, WB等实验。
Western blot analysis of HEK293 transfered cell lysates at 50 ug per lane using GFP antibody
AtT-20 transfected with GFP-Rab27a and immunostained with GFP antibody
Primary fibroblasts transduced with ad GFP-Ra1a and immunostained with GFP antibody
兔重组单克隆抗体
Rabbit anti-GFP Recombinant Monoclonal Antibody [orb1784590]
适用于ICC, IP, WB等实验。
Detection of GFP by western blot.
Samples: Whole cell lysate from HEK293T cells transfected with EGFP-KAP1, KAP1-EGFP, or untransfected. Antibody: Rabbit anti-GFP recombinant monoclonal antibody used at 1:1000.
Detection of GFP by western blot of immunoprecipitates.Samples: Whole cell lysate from 293-F cells tranfected with EGFP-KAP1. Antibodies: Rabbit anti-GFP recombinant monoclonal antibody.
Detection of GFP by ICC. Sample: FFPE section of HEK293 cells expressing a GFP nuclear protein (left) and untransfected HEK293 cells (right). Antibody: Rabbit anti-GFP recombinant monoclonal antibody.
兔多克隆抗体EGFP antibody [orb195989]
适用于ELISA, WB等实验。有文献引用。
Western blot analysis of recombinant protein 100ng as lysate, use 1:500 dilution rate of using EGFP antibody
Western blot analysis of recombinant protein 100ng as lysate, use 1:500 dilution rate of using EGFP antibody
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